È una delle varianti del Two Hybrid System, applicabile però alle proteine citoplasmatiche.
Considerando di voler saggiare l’interazione proteina-proteina tra X e Y si agirà miristilando Y, ovvero apportando ad essa una modificazione che la renda tale da legare la membrana. Con X invece si crea una proteina di fusione legata all’ hSOS ( human SOS), la GEF umana, in grado di scambiare GDP con GTP nella proteina RAS (ricordiamo che il ciclo di RAS è necessario per la crescita e la proliferazione cellulare).

Chiamato spesso Yeast  Two Hybrid (YTH) e una delle metodiche utilizzate per lo studio delle interazioni proteina-proteina.

Come sappiamo i fattori di trascrizione sono costituiti tra l’altro da un dominio di legame al DNA: Binding Domain (BD); e da un dominio di attivazione della trascrizione: Activation Domain (AD). In realtà i due domini non devono necessariamente essere parte dello stesso peptide per risultare funzionanti, ma è sufficiente che essi siano vicini.

Il YTH sfrutta proprio questa caratteristica, in particolare del fattore di trascrizione GAL4.  Supponendo di voler saggiare l’interazione tra le proteine X e Y si creano due proteine di fusione a partire da due plasmidi: Gal4BD-X   e   Gal4AD-Y.