|
Biotecnologia -
Biologia Molecolare
|
|
Scritto da Valeria Daví
|
|
È una delle varianti del Two Hybrid System, applicabile però alle proteine citoplasmatiche.
Considerando di voler saggiare l’interazione proteina-proteina tra X e Y si agirà miristilando Y, ovvero apportando ad essa una modificazione che la renda tale da legare la membrana. Con X invece si crea una proteina di fusione legata all’ hSOS ( human SOS), la GEF umana, in grado di scambiare GDP con GTP nella proteina RAS (ricordiamo che il ciclo di RAS è necessario per la crescita e la proliferazione cellulare).
L’hSOS è omologa al GEF di lievito, chiamata cdc. Si lavora con ceppi di lievito cdc25, ceppi in cui cdc è termolabile a 25°C. Per cui se a 25°C avviene il legame tra X e Y, X viene portata a livello della membrana e l’hSOS è in grado di svolgere la sua funzione, mandando avanti il ciclo di RAS e quindi le colonie di lievito saranno visibili. Al contrario se l’interazione non avviene le colonie non potranno crescere. 
|
